HPLC法測定鹽酸丙卡特羅口服溶液含量研究

  鹽酸丙卡特羅是一種高效β2受體激動劑，可快速舒張支氣管（起效迅速、作用持久），具有顯著的平喘效果，臨床用于治療哮喘等呼吸道疾病，療效確切。常用于治療小兒肺炎等呼吸系統(tǒng)疾病，常與鹽酸氨溴索等藥物聯(lián)用。目前，鹽酸丙卡特羅口服溶液的法定含量測定標準僅見于“國家食品 藥品監(jiān)督管理總 局標準YBH06672005”，該方法及文獻報道的HPLC法均需使用乙醚和/或氯仿多次萃取樣品，并采用內標法計算含量。雖然這些方法可行，但操作繁瑣復雜，易引入誤差。本研究通過優(yōu)化色譜條件，建立了更簡便的測定方法：樣品僅需稀釋過濾即可進樣分析，采用外標法定量。新方法不僅大幅簡化了操作流程，提高了工作效率，還避免了有毒有機溶劑的使用，降低了實驗人員的健康風險，為鹽酸丙卡特羅口服溶液的質量控制提供了更優(yōu)的檢測方案。
　　一、儀器與試藥
　　采用Agilent1220高效液相色譜儀（配紫外檢測器）。鹽酸丙卡特羅對照品購自中檢院；口服溶液為自制（60ml:0.3mg，批號20230501）。乙腈（色譜純，Tedia）、辛烷磺酸鈉（離子對色譜純，天津光復）、三乙胺（分析純，南京化學試劑）均為市售。
 　 二、實驗方法與結果
　?。ㄒ唬┥V條件
　　色譜條件：C18色譜柱（4.6×250mm，5μm），流動相A為0.87g/L辛烷磺酸鈉（pH6.5）-乙腈（74:26），B為乙腈；梯度程序：0-15min100%A，16-20 min 50%A，21 min恢復100%A。檢測波長254 nm，柱溫35℃，流速1.0mL/min，進樣量20μL。
　　（二）溶液的制備
　　供試品制備：精密量取樣品10mL，用10%甲醇稀釋至50 mL，濾過后取續(xù)濾液備用?？瞻纵o料按同法處理。對照品溶液：精密稱取對照品，以10%甲醇溶解并定容至5μg/mL，濾過即得。
 　 （三）專屬性實驗
　　按“2.1”項下的色譜條件，精密量取供試品溶液、空白輔料溶液和對照品溶液各20μl，依法測定。結果顯示，丙卡特羅出峰時間約為7.2min，空白輔料溶液無干擾峰，表明輔料對主成分測定無影響，且丙卡特羅峰與輔料峰分離效果良好（分離度〉1.5），方法專屬性符合要求。
　　（四）線性與范圍試驗
　　精密配制鹽酸丙卡特羅系列濃度溶液（0.004、0.2、0.8、1.0、1.2μg/mL），經(jīng)HPLC測定后建立標準曲線。結果顯示，在0.004-1.238μg/mL范圍內，峰面積（Y）與濃度（X）呈良好線性關系，回歸方程為Y=70.931X-0.1176（R2=0.9996，n=5），線性范圍符合檢測要求。
　　（五）重復性試驗
　　平行測定6份同批次樣品，測得含量平均值為99.88%，RSD為1.02%，表明方法重復性良好。
　?。┲噩F(xiàn)性試驗
　　由不同人員、在不同日期和實驗室測定同批次樣品6次，結果平均值為100.88%，RSD為0.12%，重現(xiàn)性符合要求。
　　（七）定量限
　　以信噪比S/N≈10計算，定量限為0.041ng（相當于供試品溶液濃度的0.004%），靈敏度滿足檢測需求。
 　 （八）回收率試驗
　　按低、中、高濃度（0.91、1.14、1.37μg）各3份測定，結果如下

　  三、討論
　?。ㄒ唬┥V條件的選擇
　　當前，《英國藥典》《美國藥典》《歐洲藥典》等均未收載鹽酸丙卡特羅口服溶液，僅《中國藥典》2020年版收載了原料藥、膠囊劑和片劑，《日本藥典》第15版收載了原料藥。這些藥典方法（《中國藥典》采用C18柱，磷酸鹽緩沖液-甲醇為流動相；《日本藥典》采用C18柱，戊烷磺酸鈉-甲醇為流動相）均未考慮口服溶液中矯味劑、防腐劑等輔料對主峰的干擾。實驗證實，這些輔料會嚴重影響丙卡特羅的測定。因此，現(xiàn)有標準方法（如YBH06672005）和文獻方法均需先用氯仿/乙醚萃取去除輔料，再行HPLC分析，操作繁瑣且易產(chǎn)生誤差。本研究基于《日本藥典》方法進行優(yōu)化，建立了新的HPLC檢測方法：采用改良的色譜條件，樣品僅需稀釋過濾即可直接進樣，無需有機溶劑萃取。新方法不僅簡化了操作流程，提高了檢測效率，還避免了有毒試劑的使用，更具實用性和安全性。
　　（二）流動相的優(yōu)化
　　本研究初期參照《中國藥典》2020年版方法，發(fā)現(xiàn)存在主成分與輔料色譜峰共洗脫問題，調整流動相配比未能改善分離效果。隨后嘗試《日本藥典》15版方法，分離度雖有提升但仍未達標。經(jīng)系統(tǒng)篩選不同離子對試劑（包括己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉及辛烷磺酸鈉等），最終確定0.87g/L辛烷磺酸鈉體系能實現(xiàn)主峰與輔料的有效分離，且保留時間適中。后續(xù)優(yōu)化中，將甲醇改為乙腈顯著改善了峰形，通過調節(jié)pH至6.5并升高柱溫至35℃，進一步提升了色譜分離性能，最終建立了滿足分析要求的色譜條件。
　　四、結論
　　本研究成功建立了一種簡便、高效且環(huán)保的HPLC法，用于測定鹽酸丙卡特羅口服溶液的含量。通過優(yōu)化色譜條件，采用辛烷磺酸鈉-乙腈梯度洗脫系統(tǒng)，實現(xiàn)了主成分與輔料的有效分離，避免了傳統(tǒng)方法中有毒溶劑的使用，顯著提升了檢測效率和安全性。方法學驗證表明，該方法線性關系良好（R2=0.9996）、靈敏度高（定量限0.041ng）、回收率穩(wěn)定（101.66%），且重現(xiàn)性優(yōu)異（RSD≤1.02%），為鹽酸丙卡特羅口服溶液的質量控制提供了可靠的技術支持。未來研究可進一步探索該方法在其他復方制劑或不同劑型中的適用性，并嘗試結合自動化前處理技術以進一步提升檢測通量。此外，基于綠色化學理念，開發(fā)更低毒性的替代流動相或新型檢測技術（如UPLC-MS）也是值得關注的方向，以期在保證準確性的同時，進一步減少對環(huán)境及實驗人員的影響，推動藥品質量控制技術的可持續(xù)發(fā)展。

文章來源：  《安徽科技報》   http://xwlcp.cn/w/qt/35317.html