絞股藍皂苷對大鼠抗氧化及免疫功能的影響

絞股藍又被稱為七葉參、甘茶曼，含有大量的絞股藍皂苷、氨基酸、蛋白質(zhì)、黃酮類、糖類、維生素等，其中的絞股藍皂苷是其藥效的主要組成部分，使得絞股藍具有很好的抗氧化和衰老，增強機體免疫能力，抵抗腫瘤、心血管缺氧缺血及腦組織缺氧，保護腎臟、肝臟等之效，進而使得其成為一種有效的抗衰老、增強免疫、抗腫瘤的天然中藥材。再加上，當(dāng)前生物學(xué)、醫(yī)藥學(xué)、免疫學(xué)等眾多學(xué)科的快速發(fā)展，使得通過天然中藥材來實現(xiàn)抗衰老和增強免疫能力成為可能，本文就是在此背景下對絞股藍皂苷進行詳細的探索，著重探索其在抗氧化、降低衰老，增強免疫能力方面的效果，并進行如下詳細的報告：

1 資料與方法

1.1 一般資料

50只Wistar大鼠為研究樣本。將大鼠飼養(yǎng)兩周后平均分成五組，并分別命名為A、B、C、D、E組。

1.2 試驗方法

在各組大鼠自由飲食和飲水的基礎(chǔ)上，A、B、C、D四組大鼠于頸背皮下每只每天一次按照125mg/kg劑量注射0.1ml的D-半乳糖；A、B、C三組大鼠每只每天一次按照180mg/kg、120mg/kg、60mg/kg劑量灌胃絞股藍總皂苷水2ml；D組大鼠每只每天一次按照2ml劑量的生理鹽水進行灌胃；E組大鼠每只每天于頸背皮下分別按照0.1ml、2ml劑量進行注射和灌胃生理鹽水；在實驗的第三十天，進行眼球取血，剖檢取心臟、腦組織并快速勻漿，制成組織勻漿液，用于各項指標的檢測。

1.3 實驗藥物和試劑

絞股藍皂苷（98%）；肝素鈉、細胞培養(yǎng)液和四甲基偶氮唑鹽；大鼠淋巴細胞分層液；姬姆薩-瑞士染色液；小牛血清；超氧化物歧化酶、谷朧甘膚過氧化物酶、丙二醛、過氧化氫酶、總抗氧化能力、一氧化氮試劑盒。

1.4 檢測指標及方法

1.4.1 大鼠抗氧化檢測指標

采用DTNB顯色法、黃嘌呤氧化酶法、可見光法、硫代巴比妥酸法、硝酸還原酶法和菲林絡(luò)合法測定大鼠谷朧甘膚過氧化物酶、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、丙二醛、一氧化氮和總抗氧化能力等抗氧化指標的檢測。

1.4.2 大鼠免疫功能影響指標

大鼠免疫器官指數(shù)、白細胞數(shù)量、吞噬細胞功能和外周血液T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率來測定其免疫功能效果

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析和處理，計量資料用t檢驗，組間資料用檢驗，計數(shù)資料用檢驗，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 絞股藍皂苷對大鼠抗氧化功能的影響結(jié)果

2.1.1 大鼠血清和組織谷朧甘膚過氧化物酶活力結(jié)果：根據(jù)記錄的結(jié)果分析可以看出，D組比A、B、C、E組血清和組織中的谷朧甘膚過氧化物酶活性增強的更為顯著，且B組的活力提高程度最大，與E組接近，詳見表一。

表1 絞股藍皂苷對各組大鼠谷朧甘膚過氧化物酶影響結(jié)果

項目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	449.6±9.4b	429.3±5.4b	431.3±7.6b	423.3±9.9b	379.8±10.6
腦	76.9±4.8b	69.5±3.8b	74.7±2.1b	69.9±3.6b	58.9±3.4
組織	267.6±9.4b	250.6±10.4b	255.6±12.4b	244.3±7.3b	209.3±5.3b

注：B代表各組對比差異顯著，b代表差異極其顯著，以下各表相同。

2.1.2 大鼠血清和組織超氧化物歧化酶活力結(jié)果：與E組相比較來說，A、B組血清和組織中的超氧化物歧化酶活力明顯增強，C組增強程度最低，D組與其相差不大，詳見表二。

 

表2 絞股藍皂苷對各組大鼠超氧化物歧化酶活力影響結(jié)果

項目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	120.6±4.4b	114.3±6.4B	118.3±4.6b	113.3±9.9B	106.8±6.6
腦	169.9±8.8b	165.5±8.8B	168.7±12.1b	159.9±11.6	151.9±6.4
組織	234.6±4.4b	235.6±7.4b	240.1±6.4b	237.3±10.9b	216.3±5.3

2.1.3 大鼠血清和組織過氧化氫酶活力結(jié)果：較之于E組，A、D組過氧化氫酶活力極其明顯增強，C組差異明顯增強，B組不明顯，詳見表三。

表3 絞股藍皂苷對各組大鼠過氧化氫酶活力影響結(jié)果

項目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	14.6±1.4b	12.0±1.4b	13.3±1.6b	11.3±1.3B	8.8±1.6
腦	14.9±0.8b	13.2±1.8b	14.7±0.9b	12.2±1.6B	9.5±1.4
組織	11.6±1.4b	10.6±0.9b	11.1±1.4b	10.3±1.2B	7.9±1.3

2.1.4 大鼠血清和組織丙二醛測定結(jié)果：較之于E組，B組丙二醛顯著增強，存在極其差距的差異，A組顯著差異，C、D組不明顯，詳見表四。

表4 絞股藍皂苷對各組大鼠丙二醛含量影響結(jié)果

項目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	3.6±0.4B	3.8±0.6B	3.3±0.6b	3.5±0.6B	4.4±0.6
腦	7.9±0.6b	9.2±0.8	8.2±0.9b	8.4±0.4B	10.1±0.4
組織	8.6±1.0b	9.1±0.9B	8.6±1.4b	9.3±1.2	10.8±0.3

2.1.5 大鼠血清和組織一氧化氮測定結(jié)果：較之于E組，B組一氧化氮顯著降低，差異極其明顯，且與D組相當(dāng)，C組不明顯，詳見表五。

表5 絞股藍皂苷對各組大鼠一氧化氮含量影響結(jié)果

項目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	10.3±0.4b	11.5±0.6B	10.6±0.6b	11.7±0.3B	13.4±0.6
腦	4.2±0.2B	4.8±0.6	4.3±0.3B	4.7±0.6	5.4±0.6
組織	1.6±0.4B	1.4±0.7B	1.1±0.5b	1.5±0.6	2.4±0.3

2.1.6 大鼠血清和組織總抗氧化能力結(jié)果：較之于E組，B組總抗氧化能力顯著增強，差異極其顯著，D組差異極顯著，C組心臟和A組腦組織中無顯著差異，詳見表六。

表6 絞股藍皂苷對各組大鼠總抗氧化能力影響結(jié)果

項目	E組	A組	B組	C組	D組
血清	8.3±0.2B	8.2±0.2B	8.9±0.5b	8.2±0.2B	7.4±0.4
腦	2.8±0.2b	2.2±0.1	3.3±0.1b	3.1±0.1b	2.4±0.2
組織	4.4±0.3B	4.4±0.2b	4.5±0.3b	4.1±0.3	3.8±0.3

2.2 絞股藍皂苷對大鼠免疫功能的影響結(jié)果

絞股藍皂苷對大鼠免疫功能各指標影響結(jié)果分析:與E組相比，A、B、D組的胸腺、脾臟指數(shù)明顯提高，A、B、D組的白細胞數(shù)量明顯增加，具有極顯著差異，C組無顯著差異；A、B組吞噬細胞吞噬率明顯增加，差異極顯著，C、D組有顯著差異；B組外周T血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率明顯提高，差異極顯著，A、D組有顯著差異，C組無明顯差異，詳見表七。

表7 絞股藍皂苷對各組大鼠免疫功能各指標影響結(jié)果

項目	E組	A組	B組	C組	D組
胸腺	2.2±0.2b	2.3±0.4b	2.3±0.1b	2.1±0.1	2.0±0.1
脾臟	3.5±0.2B	3.4±0.1B	3.4±0.1b	3.2±0.1	3.1±0.1
白細胞	10.9±0.6B	10.8±0.5B	11.6±0.9b	10.1±0.8	9.5±0.9
吞噬率	46.3±3.6B	47.1±3.0b	47.3±3.5b	46.1±2.8B	41.5±1.4
刺激指數(shù)	1.3±0.1B	1.2±0.1B	1.3±0.2b	1.1±0.2	1.0±0.1

3 討論

3.1 絞股藍皂苷對大鼠抗氧化功能討論

在絞股藍皂苷對大鼠抗氧化功能的影響方面采用了D-半乳糖誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生亞急性衰老反應(yīng)構(gòu)建大鼠衰老模型來具體研究其在抗衰老方面的表現(xiàn)。自由基是機體代謝過程中產(chǎn)生的內(nèi)源性物質(zhì)，正常情況下發(fā)揮著滅菌、調(diào)節(jié)免疫等作用，機體發(fā)生病變時，自由基含量會顯著增加，產(chǎn)生超氧化反應(yīng)，改變機體細胞結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致免疫力下降、腫瘤和炎癥等發(fā)生，而動物體內(nèi)包含著氧化物歧化酶、谷朧甘膚過氧化物酶、過氧化氫酶等可以有效清除自由基的抗氧化酶系統(tǒng)，而丙二醛作為自由基脂質(zhì)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，可以很好的反應(yīng)機體脂質(zhì)過氧化作用和細胞功能受損程度，具體來說：

（1）谷朧甘膚過氧化物酶是機體普遍存在的催進過氧化氫分解的重要的酶類，并使有害的過氧化物還原為無害的羥基化合物來保護機體生物膜不受過氧化損害，起到抗氧化作用。而絞股藍皂苷可以通過提高機體細胞免疫功能，抑制脂質(zhì)過氧化物的生成，來提高其谷朧甘膚過氧化物酶活力，進而提高機體抗氧化能力。

（2）超氧化物歧化酶作為機體重要的抗氧化酶之一，主要通過對超氧化物陰離子自由基轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫和氧離子反應(yīng)的促進作用來減少機體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護機體細胞和組織免受損害，同時，其清除自由基能力會隨著年齡的增長而降低，也是它成為衰老的一個主要標志。醫(yī)學(xué)界大量文獻和實驗已經(jīng)證明絞股藍皂苷能有效的增強衰老大鼠血清和心肌超氧化物歧化酶活力，并改善缺血心肌的收縮性能，縮小梗死面積，增強心肌和組織內(nèi)超氧化物歧化酶活力。

（3）正常代謝情況下，機體會產(chǎn)生少量的含氧自由基不僅不會對機體產(chǎn)生傷害，還能起到殺菌和調(diào)節(jié)免疫作用，并通過體內(nèi)的抗氧化酶和抗氧化劑清除出體外，只有機體病變，體內(nèi)抗氧化酶活性下降時，過多的氧自由基不能及時被清除并排出體外，這才導(dǎo)致其與機體生物大分子發(fā)生反應(yīng)，并生成大量過氧化物，進而造成體積細胞和組織運行的障礙。過氧化氫酶可以將其有效的直接分解，并降低其濃度，進而保護機體細胞的穩(wěn)定和正常運行。而不同劑量的絞股藍皂苷可以對過氧化氫酶活性的增強起到不同程度的作用，進而幫助其發(fā)揮作用。

（4）機體的氧自由基可以攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸來引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，生成脂質(zhì)過氧化物，這種過氧化反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化物會引起機體細胞的損害。丙二醛作為機體內(nèi)氧自由基代謝中的脂質(zhì)氧化物，可以有效的反應(yīng)機體脂質(zhì)過氧化自由基的發(fā)生與否和發(fā)生及損害程度如何。而絞股藍皂苷可以有效地抑制機體丙二醛的生成，降低其含量和濃度，提高機體對抗自由基氧化反應(yīng)引起的組織和細胞損害，進而增強機體清除自由基、抗氧化能力。

（5）當(dāng)一氧化氮濃度和含量很低時，不僅可以依靠自身的毒性起到殺菌作用，還可以通過吞噬細胞的激活實現(xiàn)有害物質(zhì)的清除，更能與機體其它分子配合作用使病毒細胞無法生長；當(dāng)含量過高時，會加劇免疫病理過程，損害組織，誘發(fā)基因突變和腫瘤等產(chǎn)生；當(dāng)濃度很高時，會增加機體自由基，加重氧化應(yīng)激反應(yīng)。絞股藍皂苷可以有效地抑制機體一氧化氮的升高，減少其釋放，并很好的抑制誘生型一氧化氮合成酶，提高機體抗衰老能力。

（6）機體總抗氧化能力的強弱與其健康程度密切相關(guān)，通過抗氧化體系可以有效地清除自由基和活性氧，避免機體發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，還可以通過過氧化物的分解，切斷氧化反應(yīng)鏈條，有著重要的意義。。

3.2 絞股藍皂苷對大鼠免疫功能影響的討論

機體大部分免疫細胞多分布于胸腺和脾臟內(nèi)，使得胸腺和脾臟成為機體重要的免疫器官。通過胸腺和脾臟重量指數(shù)的測量可以在很大程度上反應(yīng)機體免疫器官內(nèi)淋巴細胞數(shù)量，幫助了解和掌握機體免疫能力。絞股藍皂苷能增加大鼠的脾臟、胸腺重量明顯增加，這表明絞股藍皂苷能有效的提高機體免疫指數(shù)。

  （2）白細胞是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分可以有效的抵抗外來病原體的侵入，對侵入機體的病原體起到吞噬和破壞作用，進而參與到機體非特異性免疫的過程，并起到重大作用。一般來說，當(dāng)白細胞總數(shù)減少時機體對病原體的免疫和抵抗能力也會降低。絞股藍皂苷可以有效的提高機體白細胞含量。

（3）吞噬細胞是機體吞噬系統(tǒng)的重要組成部分，在非特異性免疫中發(fā)揮重要作用，可以很好的吞噬機體異物，處理抗原，而絞股藍中草藥可以增強吞噬細胞和其吞噬能力促進該功能的發(fā)揮，不僅能非特異性的吞噬侵入機體的病原體和異物，還能將病原體呈現(xiàn)給T、B淋巴細胞，進而參與到機體的特異、非特異性的免疫系統(tǒng)。使用絞股藍皂苷組大鼠的吞噬細胞指數(shù)和百分率明顯提高，說明絞股藍皂苷可以很好的增強機體吞噬功能，提高機體免疫力。

（4）細胞免疫是T淋巴細胞介導(dǎo)的重要機體免疫反應(yīng)，可以抵抗細胞內(nèi)微生物感染，并促進破壞或溶解感染微生物細胞的產(chǎn)生和效用發(fā)揮。T淋巴細胞是介導(dǎo)組織免疫的重要細胞，來源于骨髓造血干細胞，主要分布于淋巴結(jié)、脾臟等外周免疫器官和血液，并依賴胸腺完成分化和成熟，可以很好的反應(yīng)機體細胞免疫狀況。而絞股藍皂苷可以有效地增加T淋巴細胞數(shù)量，并對其免疫功能的發(fā)揮起到很好的促進作用。

參考文獻

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